菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表（试验菌液的制备和使用）

 菌液制备按表（试验菌液的制备和使用）规定程序培养各试验菌株。取黄金葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念球菌的新鲜培养物，用PH7.1无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉菌的新鲜培养物加入3~5ml含0.05%聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在温室下放置，应在2~8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用。

 阴性对照

 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。

 培养基适用性检查

 微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。

按表（试验菌液的制备和使用）规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙式葡萄糖琼脂培养基平板，置表（试验菌液的制备和使用）规定条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

 被检固体培养基上的菌落平均数量与对照培养基上的菌落数量的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。